本试剂盒采用升级版ARMS技术:本产品对传统扩增阻滞突变系统PCR(Amplification Refractory Mutation System PCR,ARMS-PCR)进行技术改良,实现样本检测的高敏感性、高特异性和低经济负担。相比于一代测序具有更高的灵敏度优势;相比ddPCR可以降低假阳性严重误导。
本试剂盒基于实时PCR平台,结合等位基因特异性扩增(ARMS)技术和野生型基因扩增抑制技术检测BRAF基因V600E突变。ARMS技术是指PCR引物的3’端末位碱基必须与其模板DNA互补才能有效扩增。通过设计特异性ARMS 引物,并在引物3'末端引入错配以提高引物延伸的特异性防止发生错配,对存在V600E突变的BRAF基因靶序列进行PCR扩增放大,并利用FAM基因标记的Taqman探针对扩增产物进行检测。另外采用野生型基因扩增抑制技术,利用block封闭探针封闭野生型BRAF基因,使ARMS体系能够耐受更高浓度的背景野生型BRAF基因,提高检测灵敏度。同时本试剂盒在反应体系中引入UDG防污染系统,包括dUTP和UDG酶组分。在PCR反应中以dUTP替代dTTP掺入DNA中,形成了含dU碱基的PCR扩增产物,UDG酶能选择性断裂单链和双链DNA中dU碱基的糖苷键,降解含dU的PCR扩增产物。天然的、未经修饰的DNA不含dU,不受UDG酶影响,可继续作为PCR扩增的模板进行扩增。