首页 > 常见问题解答

这个试剂盒的检测原理是什么?

本试剂盒采用升级版ARMS技术:本产品基于扩增阻滞突变系统PCR Amplification Refractory Mutation System PCRARMS-PCR)进行技术改良,实现样本检测的高敏感性、高特异性和低经济负担。相比于一代测序具有更高的灵敏度优势;相比ddPCR可以降低假阳性严重误导。

本试剂盒基于实时PCR平台,结合等位基因特异性扩增(ARMS)技术和野生型基因扩增抑制技术检测 BRAF 基因 V600E 突变。ARMS 技术是指 PCR引物的3’端末位碱基必须与其模板 DNA互补才能有效扩增。通过设计特异性ARMS 引物,并在引物3’末端的第二个碱基引入错配以提高引物延伸的特异性防止发生错配,对存在 V600E 突变的 BRAF 基因靶序列进行 PCR扩增放大,并利用 FAM 基因标记的 Taqman 探针对扩增产物进行检测。另外采用野生型基因扩增抑制技术,利用block 封闭探针封闭野生型 BRAF 基因,使ARMS体系能够耐受更高浓度的背景野生型 BRAF 基因,提高检测灵敏度。同时本试剂盒在反应体系中引入 UDG 防污染系统,包括 dUTP UDG 酶组分。在 PCR 反应中以 dUTP 替代 dTTP 掺入 DNA 中,形成了含 dU 碱基的 PCR 扩增产物,UDG 酶能选择性断裂单链和双链 DNA dU 碱基的糖苷键,降解含 dU PCR 扩增产物。天然的、未经修饰的 DNA 不含 dU,不受 UDG 酶影响,可继续作为PCR扩增的模板进行扩增。


版权所有 © 2021 杭州布平医疗管理有限公司 浙ICP备16046983号-2